本发明涉及兽用疫苗佐剂技术领域，尤其涉及一种兽用疫苗佐剂及其制备方法和应用。本发明所述兽用疫苗佐剂由包括特定重量百分比的注射用油、精制司本‑80、精制吐温‑80、卡波姆和香菇多糖制备得到，其获得的产品性质稳定，可解决溶液因表面张力改变而引起的疫苗乳剂不稳定的问题，有助于延长疫苗保质期并改善疫苗品质，同时，香菇多糖的添加能显著提升疫苗产生高水平免疫反应。