本发明公开了一种CK‑MB检测试剂盒，包括校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有咪唑，所述酶结合物工作液中含有酶标记的CK‑MB抗体，所述磁珠结合物工作液中含有CK‑MB抗体标记的磁珠。上述的CK‑MB检测试剂盒能够实现对全血样本中CK‑MB的准确测定，简化了检测步骤，提高了检测效率。试剂盒最低检测限为1ng/ml，线性范围为1～300ng/ml，检测灵敏度高，线性范围宽，检测结果准确。本发明还公开了一种上述的CK‑MB检测试剂盒的使用方法，其使用步骤简单，有效缩短了CK‑MB的检测时间，有利于实现CK‑MB的快速、灵敏检测。