本发明公开了一种cTnI检测试剂盒，包括校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有咪唑，所述酶结合物工作液中含有酶标记的cTnI抗体，所述磁珠结合物工作液中含有cTnI抗体标记的磁珠。上述的cTnI检测试剂盒能够实现对全血样本中cTnI的准确测定，简化了检测步骤，提高了检测效率。试剂盒最低检测限为0.02ng/ml，线性范围为0.02‑50ng/ml，检测灵敏度高，线性范围宽，检测结果准确。本发明还公开了一种上述的cTnI检测试剂盒的使用方法，其使用步骤简单，有效缩短了cTnI的检测时间，有利于实现cTnI的快速、灵敏检测。