本发明涉及纳米医用纤维材料制备的技术领域，具体公开一种多彩抗菌纳米纤维膜及其制备方法和应用。所述多彩抗菌纳米纤维膜包括氨基化壳聚糖载体和掺杂在所述氨基化载体中的天然染料；其中，所述氨基化壳聚糖中的氨基含量为40％‑45％，天然染料为黄岑苷、栀子黄、栀子蓝和红花色素。上述多彩抗菌纳米纤维膜通过静电纺丝技术制备得到。本发明制备的纳米纤维膜具有多彩性、吸附性能强、抑菌效果佳的优势，可显著提高创面的愈合效果，在医用敷料领域具有广阔的应用前景。