本发明属于纳米抗菌材料技术领域，具体涉及一种Cu‑In‑Zn‑Se复合纳米微球的制备方法及其应用，制备方法包括：（1）配制碘化亚铜、醋酸铟、硬脂酸锌、1‑十八烯、油胺和十二硫醇混合溶液；（2）配制硒的前驱溶液，将硒粉、三正辛基膦、1‑十八烯和油胺混合加热溶解；（3）将步骤（1）的混合溶液加热至充分溶解，然后向其中加入硒的前驱溶液，升温至200‑280℃保温10‑40 min，得反应溶液；（4）将反应溶液离心，将固相清洗并分散在氯仿中，得到Cu‑In‑Zn‑Se纳米颗粒的氯仿溶液；（5）将Cu‑In‑Zn‑Se纳米颗粒的氯仿溶液与聚（马来酸酐‑alt‑1‑十八烯）氯仿溶液混合均匀后干燥；（6）将步骤（5）的产物加入氢氧化钠溶液，超声分散，透析法去除多余离子至pH为中性即可。