本发明公开了一种小儿七星茶颗粒中钩藤碱和异钩藤碱含量测定方法，其包括如下步骤：(1)混合对照品溶液的制备：称取钩藤碱和异钩藤碱适量，精密称定，加甲醇配制成钩藤碱和异钩藤碱的混合对照溶液；(2)供试品溶液的制备：准确称取小儿七星茶颗粒，加入热水溶解，超声处理，放冷，用氨水调节pH值，再用乙酸乙酯振摇提取，回收乙酸乙酯液，残渣加甲醇溶解，即可；(3)高效液相色谱法测定：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：乙腈(A):0.02‑0.07％二乙胺‑(7‑10)mM醋酸铵(B)＝40‑60:60‑40V/V；流速：0.8‑1.2mL/min；洗脱时间：35‑60分钟；柱温：25‑35℃；检测波长：240‑250nm；该含量测定方法操作简单、准确反映产品的真实含量，适合产业化日常生产检验。