本发明公开了一种芝麻多肽的制备方法，包括如下步骤：将芝麻蛋白与蒸馏水混匀，并进行加热减压保温处理，得到芝麻蛋白浆液；调节所述芝麻蛋白浆液pH至5～6，并加入中性蛋白酶、半纤维素酶和胰酶进行超声辅助酶解，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；调节所述一次酶解液的pH至8～9，并加入糖化酶和碱性蛋白酶进行超声辅助酶解，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；对所述二次酶解液进行微波灭酶处理，得到灭酶酶解液；将所述灭酶酶解液依次进行超滤、微滤、反渗透浓缩处理，并经冷冻干燥，得到芝麻多肽。该芝麻多肽的制备方法，工艺安全、制备便捷。