本发明公开了用于分割式浓醪酒精发酵的生物氮源营养剂的制备方法及应用生物氮源营养剂进行分割式浓醪酒精发酵的老陈醋酿造方法，以黄豆粕与花生粕这种榨油后的副产物为原料，接种产蛋白酶菌种米曲霉AS3.951经培养制作一种生物氮源营养剂，应用于老陈醋的分割式浓醪酒精发酵工艺，不仅可为酵母菌提供氮源营养，还可利用营养剂中酶活力达2000~2300u/g（干基）的蛋白酶分解酿醋原料高粱中的蛋白质，提高原料利用率，实现老陈醋的高浓度酒精发酵，并提升老陈醋的品质。