一种病毒VP2蛋白分离纯化的规模化生产方法，属于生物制品技术领域。为解决利用大肠杆菌表达传染性法氏囊VP2蛋白生产鸡传染性法氏囊病疫苗会产生内毒素的问题，本发明提供了一种病毒VP2蛋白分离纯化的规模化生产方法，该方法为将大肠杆菌破碎后，加入一定比例的脱氧胆酸钠，然后加入有机磷酸盐缓冲液作为螯合剂，调节适当的pH，同时在溶液中加入一定浓度的NaCl，充分混匀后，利用中空纤维柱的切向流过滤功能，将内毒素单体去除。本发明所述生产方法既能生产出高浓度的法氏囊VP2蛋白，又能符合新版兽药GMP生产要求，具备低生产成本的特点。