本发明实施例公开了一种驴胎盘活性多肽的制备方法，包括如下步骤：步骤100、选取新鲜驴胎盘组织进行清洗剪碎工序后，置于缓冲液中进行匀浆工序和离心工序，获得上清液；步骤200、向上清液中加入蛋白酶进行酶解反应，获得酶解液；步骤300、将酶解液升温进行酶灭活处理工序，获得驴胎盘活性多肽液；步骤400、将驴胎盘活性多肽液进行冷冻干燥处理，获得驴胎盘活性多肽干粉。本发明主要采用盐离子和有机溶剂的生物缓冲液进行组织匀浆获取上清液，有效的改变蛋白质的溶解性，从而使不易溶于水相中的蛋白质溶解，提高胎盘蛋白的提取丰度以及提取率；与传统工艺相比获得的驴胎盘活性多肽水解度更高，分子量更小，易于实现大规模生产。