本发明公开了一种BHK21悬浮细胞高密度流加培养方法及其在口蹄疫病毒增殖中的应用。本发明根据BHK21细胞在ZN‑MEM基础培养基中生长及代谢水平，提出了一种BHK21细胞专用的流加浓缩培养液，包括氨基酸、葡萄糖、维生素和其它添加物成份。同时，在BHK21细胞批式培养基础上，设计了一套个性化流加策略，经规模化培养应用，进一步优化生物反应器关键控制参数，确定了BHK21细胞的流加培养方法。该方法有效消除了底物和产物的抑制和毒害作用，促进了细胞的生长和代谢，提高了细胞的培养效能。采用本发明方法获得的BHK21细胞，对口蹄疫病毒的感染性增加，病毒的有效抗原含量得到显著提升，提高了口蹄疫病毒的生产效率，从而为高品质疫苗的生产奠定了基础，具有显著的经济效益。