本发明公开了一种快速检测塞内卡病毒的试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括RPA引物探针混合液，PBST溶液，测流层析试纸条，RPA冻干酶和RPA反应预混液；所述RPA引物探针混合液中的引物的基因序列为：上游引物：5′‑AATTCCTGTTTGACCGATCTCGGCTACTGA‑3′；下游引物：5′‑biotin‑CCAGTAAAGTGGTAGGGTACGTGCAGTTGGTC‑3′；所述RPA引物探针的基因序列为：5′‑FAM‑GGCCTGTACGTCAACCCGTCTGACAGTGGCG‑THF‑TCTCGCTAACACTTC‑Spacer C3‑3′。本发明提供的检测塞内卡病毒的试剂盒特异性强，诊断准确，敏感性高于传统PCR，本发明提供的塞内卡病毒的检测方法操作极其简便快速，不仅适用于临床诊断而且可以应用于食品安全检测、养殖场现场检测、环境评估等多种领域。