1. 样品的吸收特性:首先需要了解样品在不同波长下的吸收特性。荧光染料或标记物通常会在特定波长范围内吸收光能,并在较长波长处发射荧光。因此,选择一个被样品吸收的波长可以最大程度地提高检测的灵敏度。
2. 荧光染料的发射峰值:荧光染料或标记物通常在特定波长下具有最大发射强度的发射峰值。因此,为了获得最高的荧光信号,应选择与染料发射峰值最接近的激发波长。
3. 光源的可用波长范围:选择激发波长还应考虑所使用的光源的可用波长范围。不同的光源具有不同的激发波长选择,因此需要确保选定的波长在光源所能提供的范围内。
4. 背景信号的最小化:特定波长下可能存在其他非特定信号的背景荧光或散射,这可能干扰希望测量的信号。为了最小化背景信号,可以选择荧光染料的峰值波长附近但不包含任何非特定信号的激发波长。
总的来说,选择荧光激发波长需要综合考虑样品吸收特性、荧光染料的发射峰值、光源的波长范围以及背景信号的最小化。实验前最好进行波长扫描试验,以确定最佳的激发波长。